武汉科谨生物多年从事酵母单杂交文库筛选,酵母单杂交一对一互作验证,配套EMSA、双荧光素酶报告基因检测、ChIP检测等,一站式解决蛋白-DNA互作,结果准确可靠。 一、技术介绍
真核生物基因的转录起始需要转录因子参与,转录因子通常由DNA结合结构域(DNA_ binding domain,BD)和转录激活结构域(activation domain,AD)组成。用于酵母单杂交系统的酵母GAL4蛋白是一种典型的转录因子,GAL4的DNA结构域靠近羧基端,含有几个锌指结构,可激活酵母半乳糖苷酶的上游激活位点(UAS),而转录激活结构域可与RNA聚合酶或转录因子TFD相互作用,提高RNA聚合酶的活性。在这一过程中,DNA结合结构域和转录激活结构域可完全独立地发挥作用。在GAL4系统中构建与基因的ORFs融合的激活结构域GAL4-AD的特异载体,顺式作用元件与GAL4的DNA结合结构域GAL4-BD融合构建载体,分别转化酵母细胞。在酵母内表达的蛋白若与顺式作用元件发生相互作用时,就会将GAL4-BD和GAL4-AD结合在一起,从而与上游激活序列( upstream activatingsequence,UAS)结合,激活相应报告基因的表达,在相应的营养缺陷型培养基上筛选阳性。
酵母单杂交系统应用:
(1)进一步鉴定DNA-蛋白质之间是否存在相互作用;
(2)筛选启动子顺式作用元件或其它DNA序列结合的新蛋白;
(3)定位已经证实的具有相互作用的DNA结合蛋白的DNA结合结构域;
(4)准确定位与DNA结合的核苷酸序列。
二、服务内容
(1)酵母单杂交载体构建(
pHis2-Bait或pAbAi-Bait和AD-prey质粒);
(2)
Bait序列自激活检测和抑制浓度筛选(ABA或3-AT);
(3)酵母单杂交文库筛选;
(4)酵母单杂交一对一互作验证。
三、客户提供样本
目的基因序列或质粒模板。
四、交付结果
完整的实验报告,包括实验数据,平板图片,结果分析等。
五、结果展示
(1)Bait诱饵序列自激活检测和ABA抑制浓度筛选;
(2)酵母单杂交点对点检测,含阴性对照组、阳性对照组和实验组平行结果。